Cartas al editor

Aislamiento de los serotipos 1 y 3 del Virus Dengue por Shell Vial modificado en un paciente coinfectado

Isolation of Dengue virus serotype 1 and 3 from a coinfected patient using a modified Shell Vial culture

 

Juan Sulca1,a, Carolina Guevara1,b, Eric S. Halsey1,c, Julia S. Ampuero1,d

1 Centro de Investigación de Enfermedades Tropicales, NAMRU-6. Lima, Perú

a Biólogo; b Biólogo magister en microbiología; c Médico infectólogo; d Médico doctor en enfermedades infecciosas y tropicales


Sr. Editor. En el Perú se ha identificado la circulación de los cuatro serotipos del virus dengue (DENV), con circulación simultánea de más de un serotipo en departamentos como Loreto y Madre de Dios (1), habiéndose diagnosticado coinfecciones por dos serotipos de dengue en la provincia de Sullana, Piura, en el noroeste peruano (2).Los casos reportados de coinfecciones por dengue han sido escasos, y la mayoría identificados mediante técnicas moleculares (RT-PCR) (3,4).

Diferentes líneas celulares, por ejemplo la C6/36 y LLC-MK2, se utilizan para aislar el DENV en técnicas como la estándar, que utiliza como soporte de células a los tubos, frascos, y placas. La técnica de shell vial modificado (SVM) se fundamenta en la centrifugación de los cultivos celulares después de inoculados, utilizando placas como soporte, y muestra una mejor sensibilidad que la estándar (5,6). Hasta el momento, no se han reportado coinfecciones de dengue usando esta técnica de diagnóstico.

En el año 2011 el Laboratorio de Virología del Centro de Investigación de Enfermedades Tropicales, NAMRU-6 evaluó el SVM mediante la inoculación de semillas de DENV 1, 2, 3 y 4 en varias concentraciones (0,01, 0,1, 1, 2, 4, 6 UFP/mL) y 36 combinaciones de dos serotipos en la línea celular C6/36 a razón de 100 μL/pozo por duplicado, con la subsiguiente centrifugación a 2000 rpm por 30 min a 33 °C. Seguidamente, se adicionó 1mL/pozo de medio de mantenimiento (MM) - EMEM (Quality Biological Inc.), suplementado con 2% de suero bovino fetal y 1% de antibiótico-antimicótico. Se incubó por una hora a 33 °C, realizando la cosecha de células a los 4, 7, 10, 13 y 15 días. Al cultivo celular se adicionó 0,5 mL de MM/pozo al séptimo día para las cosechas de los días 13 y 15. Después de la cosecha de células, los serotipos de dengue fueron identificados por inmunofluorescencia indirecta (IFI), utilizando anticuerpos monoclonales para cada serotipo. El estudio (NMRCD.2010.0010) fue aprobado por el Comité de Ética en Investigación de NAMRU-6 y el Instituto Nacional de Salud del Perú. Se encontró que el día óptimo de cosecha es a los trece días, en el cual se pudo recuperar 19 (53%) de las combinaciones de virus. Tres muestras de suero positivas a coinfecciones por DENV mediante RT-PCR procedentes de Puerto Maldonado y Yurimaguas fueron diluidas en MM (1:10 y 1:20) e inoculadas usando la técnica de SVM.

Se encontró una muestra positiva, identificada por IFI como DENV-1 y DENV-3 en los días 13 y 15 en ambas diluciones, la muestra positiva perteneció a una mujer de 37 años procedente de la provincia de Tambopata del departamento de Madre de Dios, siendo la primera coinfección de DENV aislada en el Perú con la técnica de SVM. Las muestras negativas podrían deberse al pobre número de virus viables en las mismas. El SVM, aparte de utilizar menor cantidad de muestra, podría incrementar el aislamiento de coinfecciones en comparación con otras técnicas de aislamiento (6). A diferencia del RT-PCR, permite recuperar virus viables para estudios futuros; sin embargo, por el periodo de incubación del cultivo celular, y por su menor sensibilidad, no es posible usarlo como prueba de diagnóstico rápido. Es necesario evaluar este método con un mayor número de muestras para determinar con más exactitud su rendimiento diagnóstico.

Descargo de responsabilidad: las opiniones y afirmaciones contenidas aquí son propias de los autores y no deben interpretarse como posición oficial o que reflejan la opinión del Ministerio de Marina, Ministerio de Defensa ni de ninguna otra agencia del gobierno de los Estados Unidos.

Fuente de financiamiento: el presente trabajo fue financiado por la Unidad de Trabajo 800000.82000.25GB.B0016.

Conflictos de interés: los autores declaran no tener conflictos de interés.

Agradecimientos: a la Dra. Amy Morrison por la revisión crítica y sugerencias para la elaboración de este artículo.

 

Referencias Bibliográficas

1. Perú, Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud. Serotipos de dengue identificados por aislamiento o RT-PCR-TR. Perú 2012 [Internet]. Lima: Instituto Nacional de Salud; 2012 [citado el 19 de abril del 2013] Disponible en: http://www.ins.gob.pe/repositorioaps/0/4/jer/virus_dengue/Serotipos%20dengue%20peru%2022032012.pdf

2. Mamani E, Figueroa D, García M, Garaycochea M, Pozo E. Infecciones concurrentes por dos serotipos del virus dengue durante un brote en el noroeste de Perú, 2008 . Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2010;27(1):16-21.

3. Araújo F, Nogueira R, de Araújo J, Ramalho I, Roriz M, de Melo M, et al. Concurrent infection with dengue virus type-2 and DENV-3 in a patient from Ceará, Brazil . Mem Inst Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro. 2006;101(8):925-8.

4. Rocco I, Barbosa M, Kanomata E. Simultaneous infection with Dengue 1 and 2 in a Brazilian patient . Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 1998;40(3):151-4.

5. Palomino M, Gutierrez V, Salas R. Estandarización del método de centrifugación en placa para el aislamiento del virus Dengue. Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2010;27(1):51-8

6. Caceda ER, Kochel TJ. Application of modified shell vial culture procedure for arbovirus detection. PLoS One. 2007;2(10):e1034.

 

Correspondencia: Juan Sulca Herencia

Dirección: Av. Venezuela, Cuadra 36 s/n, Bellavista-Callao. Lima-Perú

Teléfono: 51-1-6144121

Correo electrónico: juan.sulca@med.navy.mil

 

Recibido: 22-03-13

Aprobado: 08-05-13

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