Clonamiento, expresión y seroreactividad de la proteína recombinante de ensamblaje de lipopolisacáridos – D (LptD) de Bartonella bacilliformis

Authors

  • Astrid Flores-Nuñez Laboratorio de Biotecnología y Biología Molecular, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú.Grupo de Investigación en Bioinformática y Biología Estructural, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú.Biólogo https://orcid.org/0000-0003-0353-3091
  • Gladis Ventura Laboratorio de Biotecnología y Biología Molecular, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú.Biólogo https://orcid.org/0000-0003-2244-8714
  • Henri Bailon Laboratorio de Biotecnología y Biología Molecular, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú.magíster en Bioquímica y Biología Molecular https://orcid.org/0000-0002-9593-6092
  • Adolfo Marcelo Laboratorio de Referencia Nacional de Metaxénicas Virales, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú.Biólogo https://orcid.org/0000-0002-0043-5819
  • Gustavo Sandoval Grupo de Investigación en Bioinformática y Biología Estructural, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú.magíster en Biología Molecular https://orcid.org/0000-0002-8392-9880
  • Carlos Padilla-Rojas Laboratorio de Biotecnología y Biología Molecular, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, Lima, Perú.Biólogo https://orcid.org/0000-0002-0562-0431

DOI:

https://doi.org/10.17843/rpmesp.2022.391.9292

Keywords:

Infecciones por Bartonella, proteína LptD, Bartonella bacilliformis, Proteínas recombinantes, Antigenicidad vacunal, Biología computacional

Abstract

Objetivo. Evaluar in silico y a nivel serológico el potencial antigénico del dominio extracelular recombinante de la proteína de ensamblaje de lipopolisacáridos - D (LptD) de Bartonella bacilliformis (dexr_LptD). Materiales y métodos. Mediante el análisis in silico se realizó la selección de una proteína de B. bacilliformis con potencial antigénico e inmunogénico. El gen de la proteína seleccionada se clonó en Escherichia coli TOP10 y se expresó en Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. La proteína recombinante fue expresada usando isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) y se optimizaron las condiciones de inducción. Por último, se purificó con resina Ni-IDA (His60 Ni Superflow) y se realizó un ensayo de Western Blot. Resultados: In silico, la proteína seleccionada fue LptD por estar localizada en la membrana externa y ser antigénica e inmunogénica. Las condiciones optimizadas para la inducción del dexr_LptD fueron 0,5 mM IPTG, 16 h, medio TB (Terrific Broth), etanol al 3% (v/v), 28 ºC, OD600: 1-1,5 y 200 r.p.m. La purificación se realizó en condiciones denaturantes a pequeña escala y se obtuvo 2,6 μg/mL de dexr_LptD parcialmente purificada. El ensayo de Western Blot mostró una reacción positiva entre los sueros provenientes de pacientes con la enfermedad de Carrión y dexr_LptD, ello evidencia la antigenicidad del dexr_LptD. Conclusiones. El dexr_LptD muestra antigenicidad in silico y a nivel serológico, estos resultados son base para posteriores estudios sobre candidatos vacunales contra la enfermedad de Carrión.

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Published

2022-03-31

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1.
Flores-Nuñez A, Ventura G, Bailon H, Marcelo A, Sandoval G, Padilla-Rojas C. Clonamiento, expresión y seroreactividad de la proteína recombinante de ensamblaje de lipopolisacáridos – D (LptD) de Bartonella bacilliformis. Rev Peru Med Exp Salud Publica [Internet]. 2022 Mar. 31 [cited 2024 May 29];39(1):15-23. Available from: https://rpmesp.ins.gob.pe/index.php/rpmesp/article/view/9292

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