Estandarización y validación de una prueba de PCR para el diagnóstico precoz de leptospirosis humana

Resumen

Objetivos: Estandarizar y optimizar la prueba de PCR dirigida al gen rrs (16S) de Leptospira spp., para luego validar su uso en muestras de pacientes con síndrome febril captados en zonas endémicas del Perú. Material y métodos: Se estandarizó y validó una prueba de PCR para el diagnostico rápido de leptospirosis en muestras de sangre y orina. Se optimizó la prueba con muestras de ADN de Leptospira de diferentes especies, y se determinó en 180 muestras clínicas de pacientes con sospecha de leptospirosis su sensibilidad y especificidad en comparación con la prueba de aglutinación microscópica (MAT) y ELISA IgM. Resultados: El PCR estandarizado amplificó el ADN de 25 serovares de seis especies de Leptospira spp. No amplificó las muestras de ADN de otros microorganismos patógenos. s. La sensibilidad y especificidaddel método fue 100%in vitro. Su sensibilidad fue de 100% (IC95: 97,9 - 100%) en muestras de sangre antes de los ochoprimeros días de enfermedad y de 30% (IC95: 16,3 - 43-,7) cuando el tiempo de enfermedad fue mayor. El PCR en orinatiene una baja sensibilidad.Conclusiones:El PCR estandarizado es más sensible que las pruebas serológicas en losprimeros días de enfermedad y es poco sensible cuando la carga bacteriana es baja en sangre.