Comparación de dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi cultivados en medio axénico

Autores/as

  • Mariela López Instituto de Investigaciones Biomédicas “Dr. Francisco J. Triana Alonso”, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Carabobo. Maracay, Venezuela. Escuela de Bioanálisis, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Carabobo. Maracay, Venezuela. Licenciada en Bioanálisis
  • María G. Rivera Instituto de Investigaciones Biomédicas “Dr. Francisco J. Triana Alonso”, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Carabobo. Maracay, Venezuela. Licenciada en Bioanálisis.
  • Mercedes Viettri Biomédicas “Dr. Francisco J. Triana Alonso”, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Carabobo. Maracay, Venezuela. Licenciada en Bioanálisis.
  • María Lares Instituto de Investigaciones Biomédicas “Dr. Francisco J. Triana Alonso”, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Carabobo. Maracay, Venezuela. Técnico superior universitario en Química.
  • Antonio Morocoima Centro de Medicina Tropical de Oriente, Facultad de Medicina, Universidad de Oriente. Anzoátegui, Venezuela. Médico cirujano, magíster en Parasitología.
  • Leidi Herrera Instituto de Zoología y Ecología Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela. Caracas, Venezuela. Biólogo, doctora en Ciencias.
  • Elizabeth Ferrer Instituto de Investigaciones Biomédicas “Dr. Francisco J. Triana Alonso”, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Carabobo. Maracay, Venezuela. Departamento de Parasitología, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Carabobo. Maracay, Venezuela. Licenciada en bioanálisis, doctora en Biología Molecular.

DOI:

https://doi.org/10.17843/rpmesp.2014.312.38

Palabras clave:

Trypanosoma cruzi, Enfermedad de Chagas, ADN, Diagnóstico, Reacción en cadena de la polimerasa

Resumen

Objetivos. Comparar dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi para su uso en la amplificación de ADN de minicírculos de kinetoplasto (ADNk) mediante la técnica de Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR). Materiales y métodos. Se cultivaron epimastigotas de T. cruzi en condiciones exénicas obteniéndose masas entre 1,5 hasta 100 x 106 parásitos. A partir de estas se procedió a la extracción de ADN mediante dos protocolos: extracción con solventes orgánicos (fenol/cloroformo), y empleo de resina (Chelex®100), a partir de los diferentes sedimentos parasitarios. La concentración y pureza del ADN se determinó por espectrofotometría y la integridad se evaluó mediante electroforesis en geles de agarosa. Se realizó el análisis de varianza y comparaciones de medias mediante la prueba de Tukey, utilizando el software Statistix 8.0. Resultados. Se realizaron diez extracciones de ADN de cada una de las diferentes cantidades de parásitos sedimentados. En la extracción de ADN con la resina Chelex®100 se obtuvo mayor rendimiento, pero menor pureza e integridad respecto a la extracción con solventes orgánicos. Sin embargo, permitió la amplificación del producto de 330 pb de ADNk de T. cruzi. Conclusiones. Aun cuando la técnica de Chelex®100 proporcionó menor pureza e integridad del ADN, permitió la amplificación con éxito de ADNk por PCR, evitando el uso de técnicas laboriosas y solventes orgánicos tóxicos.

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Publicado

2014-07-02

Número

Sección

Artículos de Investigación

Cómo citar

1.
López M, Rivera MG, Viettri M, Lares M, Morocoima A, Herrera L, et al. Comparación de dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi cultivados en medio axénico. Rev Peru Med Exp Salud Publica [Internet]. 2014 Jul. 2 [cited 2024 Nov. 24];31(2). Available from: https://rpmesp.ins.gob.pe/index.php/rpmesp/article/view/38

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